1999年,参演车仁表,宋允儿主演的电视剧《铁汉柔情》,正式开始演艺事业。韩恩贞2002年,在张娜拉,张赫主演的爱情剧《明朗少女成功记》中扮演“恶女”尹罗熙。2004年,与宋慧乔,Rain主演爱情喜剧《浪漫满屋》,在剧中扮演李英宰的初恋江慧媛,但后来李英宰爱上韩智恩,江慧媛屡次刺激智恩,是一个温柔但又充满心机的女人。2005年,与金载沅,柳真主演偶像爱情喜剧《美妙人生》,在剧中饰演李彩英。2006年,凭借出演的电视剧《首尔1945》获得KBS演技大赏女子优秀演技奖。韩恩贞2007年,在SBSTV电视剧《相爱的人啊》中饰演被自己深爱的男人背叛后,独自抚养孩子的电视剧编剧金善熙。2008年,在一部以委托人和律师为主角,讲述四名男女之间的爱情和金钱的幽默剧《大韩民国律师》中饰演李爱利；同年,出演以韩国古代兵器神机箭为故事主线的电影《神机箭》,在片中饰演在朝鲜王朝世宗大王设立的专门研究火药武器部门担任神机箭的研究人员洪里。2009年,与权相佑,林允儿主演励志爱情剧《乞丐变王子》,在剧中饰演韩国MOER信用金库会长的独生女儿张世恩。2010年,因领衔主演韩国KBS电视台纳凉特别剧《九尾狐姐姐传》获得KBS演技大赏迷你剧集部门优秀女演员奖。2011年,凭借出演的奇幻悬疑剧《四百年的梦》获得KBS演技大赏特辑单幕剧奖；同年,领衔主演恐怖电影《寄生灵》,在片中饰演徐长焕怀孕的妻子瑞妮。2012年11月28日,主演的电影《致给她》举行发布会。2014年,与金康宇,李诗英主演韩国KBS电视台水木剧《GoldenCross》,在剧中饰演GoldenCross俱乐部代表洪莎拉；同年,参演韩国KBS电视台水木剧《Ironman》,在剧中饰演男主角朱洪斌的初恋女友金泰希；12月,与SidusHQ签约。2023年6月24日,参演电视剧《榴莲小姐》播出。
2009年10月16日,韩恩贞和Rain参加了韩国庆熙大学举行创校60周年纪念音乐会。2013年06月30日,韩恩贞担任了在首尔棒球场举行的韩国职业棒球联赛某场比赛的开球嘉宾。